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Death of a Cell: Apoptosis

"A Short Overview of the Role in Health and Disease – Signal Transduction"

 

세포 내,외의 커뮤니케이션 기작과 대사 조절에서 각각의 역할 즉, signal transduction은 현대 생명과학의 초석이 되는 부분입니다.

머크 바이오사이언스에서는 본사에서 출간한 “Signal Transduction Book”을 기반으로 총 4회에 걸친 기획 컨텐츠를 준비하였으니, 이를 통해 Signal Transduction에 대한 이론적 지식을 정리할 기회가 되시길 바랍니다.

♦ Cell Cycle: A Brief Overview
♦ Death of a Cell: Apoptosis

    Overview
    Technical Tip
    Recommendation by Author


♦ Pluripotent Stem Cell 
♦ Diabetes and Obesity

Death of a Cell: Apoptosis

 

Apoptosis란 외부인자의 자극이나 내적인 변화에 의해서 그 세포들이 자발적으로 죽음에 이르는 것으로 programmed cell death(PCD)라고도 말합니다.

이것은 생물체의 발생 과정 중에 효용성을 상실한 세포, 암세포, 바이러스에 감염된 세포, 자가면역 세포 등과 같이 불필요하거나 위험한 세포들의 제거 기전으로 사용되고 있습니다.

반면, necrosis는 갑작스런 세포의 죽음으로 염증을 유발하여 괴사를 일으키는 것을 말합니다.

Merck-KR:/Signal_Transduction/apoptosis_pathway_sm.jpg

 

Apoptosis의 기능

 

Cell termination: 바이러스 감염, 스트레스 등의 원인에 의해 damage를 입은 세포는 스스로 제거되어 나머지 조직들을 보호하게 합니다.

Homeostasis: Adult organism에서 세포수는 적절한 세포 사멸과 세포분열을 통해 유지됩니다. 여기서, Apoptosis는 세포 사멸에 관여하는 기전입니다.

세포 분열 > 세포 사멸 : Tumor    
세포 분열 < 세포 사멸 : Cell loss

Development: 식물이나 동물의 조직 발생학에 있어서 apoptosis는 아주 중요한 역할을 합니다. 가끔 조직이나 기관의 발생 단계에서 불균형 분화 또는 분리가 진행될 때, apoptosis는 이를 정상적인 형태로 되돌려 주는 역할을 합니다.

 

Apopotosis vs. Necrosis

 

Type of cell death Apoptosis Necrosis
Feature    
Plasma Membrane
  • Phosphatidylserine translocated to surface
  • Blebbed
  • Ruptured, early lysis without formation of vesicles
Mitochondria
  • Increased membrane permeability
  • Release of cytochrome c into cytocol
  • Swelling
Cell Degradation
  • Phagocyosis
  • No inflammation
  • Release of proinflammatory molecules
  • Inflammation
Cell Shape
  • Formation of apoptotic bodies  
  •  Disrupted and swollen
DNA Fragmentation
  •  Internucleosomal DNA cleavage; free 3'-OH ends
  • Diffuse and random  
Cytoplasm
  •  Presence of apoptotic bodies
  •  Vacuolation of cytoplasm

 

Reference:

Yuan, J. 2006. Mol. Cell 23, 1.
Bouchier-Hayes, L . et al . 2005 . J. Clin. Invest. 115, 2640 .
Fadeel, B ., et al . 2005 . J. Intern. Med. 258, 479 .
Fink, S . L ., et al . 2005 . Infect. Immun. 73, 1907 .
Green, D .R . et al . 2005 . J. Clin. Invest. 115, 2610 .
Wright, C . W ., et al . 2005 . J. Clin. Invest. 115, 2673 .
Edinger, A .L ., et al . 2004 . Curr. Opin. Cell. Biol. 16, 663 .
Green, D .R . et al . 2004 . Science 305, 626 .
Riedl, S . et al . 2004 . Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 5, 897 .
Salvesen, G, et al . 2004 . Oncogene 23, 2774 .
Reed, J . C . 2003 . Cancer Res. 3, 17 .

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Technical Tip

Q1: Phosphatidylserin이 유도되는 모든 apoptotic signaling pathway는 active caspase에 의해 activation 되나요?
A1: 아닙니다. Cathepsin B는 caspase-independent 과정에 대해서도 PS를 유도할 수 있습니다.

Q2: Apoptosis 반응에 대한 cell는 Annexin V에 대해 염색되지만, trypan blue나 다른 vital dye에 대해 염색이 되지 않는 이유는 무엇인가요?
A2: Early stage의 apoptosis는 intact membrane을 갖고 있고, trypan blue 등과 같은 dye는 membrane을 통과하지 못하기 때문에 염색이 되지 않습니다.

Q3: Sample buffer에 EDTA를 포함하고 있을 때, positive staining 결과를 얻을 수 없는 이유는 무엇인가요?
A3: PS에 Annexin V이 binding 하는 것은 calcium-dependent 반응입니다. EDTA는 chelating agent로써 calcium을 제거하기 때문에 Annexin V의 binding을 방해합니다.

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 Recommendation by Author

    QIA39, FragELTM DNA Fragmentation Detection Kit, Fluorescent

 

Merck:/topic/images/Biosciences/DNA_frag_QIA39.jpg

FragELTM DNA Fragmentation Detection Kit는 cell level에서 apoptosis에 의해 생성된 DNA fragment를 TdT enzyme을 이용하여 detection 하는 kit입니다.

  • Sample Type: Frozen & Paraffin tissue section, Fixed cell reparation
  • Application: Fluorescent microcopy, Flow Cytometry

 

Use of TUNEL to Measure DNA Fragmentation: DNA Fragmentation Based Kits

 

Product Application Sample Type Number of
Test/Samples
Cat. No.
Apo-BrdU™ Kit FC, IF Cells 60 Tests CBA040
Apo-Direct™ Kit FC Cells 50 Tests CBA041
FragEL™ DNA Fragmentation
Detection Kit, Colorimetric -
Klenow Enzyme
FS, PS

Frozen or paraffin sections
or fixed-cell preparations

50 Tests QIA21
FragEL™ DNA Fragmentation
Detection Kit, Colorimetric -
TdT Enzyme
FS, PS Frozen or paraffin sections
or fixed-cell preparations
50 Tests QIA33
FragEL™ DNA Fragmentation
Detection Kit, Fluorescent -
TdT Enzyme
FC Frozen or paraffin sections,
fixed cell preparations
or cell suspensions
50 Tests QIA39
Apoptosis Resource: Measurement of Apoptosis-Induced Changes at the Plasma Membrane

 

Product Application Sample Type Number of
Tests or Samples
Cat. No.

Annexin V-Biotin

Apoptosis Detection Kit II

FC, IF Intact cells 20 Tests CBA058

Annexin V-FITC

Apoptosis Detection Kit

FC, IF Intact cells 100 Tests PF032

Annexin V-Biotin

Apoptosis Detection Kit

FC, IF Intact cells 100 Tests PF036

Annexin V-FITC

Apoptosis Detection Kit II

FC, IF Intact cells 20 Tests CBA059

Annexin V-PE

Apoptosis Detection Kit

 FC, IF  Intact cells  100 or 25 Tests CBA060

 Note: FC:flow cytometry; IF: immunofluorescence 

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© Merck KGaA, Darmstadt, Germany, 2012


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